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植物組培的操作技術:繼代培養



錄入時間:2011-12-26 10:31:22 來源:互聯網

繼代培養

在初代培養的基礎上所獲得的芽、苗、胚狀體和原球莖等,數量都還不多,它們需要進一步增殖,使之越來越多,從而發揮快速繁殖的優勢。

繼代培養是繼初代培養之后的連續數代的擴繁培養過程。旨在繁殖出相當數量的無根苗,最后能達到邊繁邊生根的目的。繼代培養的后代是按幾何級數增加的過程。如果以2株苗為基礎,那么經10代將生成210株苗。

繼代培養中擴繁的方法包括:切割莖段、分離芽叢、分離胚狀體、分離原球莖等。切割莖段常用于有伸長的莖梢、莖節較明顯的培養物。這種方法簡便易行,能保持母種特性。培養基常是MS0基本培養基;分離芽叢適于由愈傷組織生出的芽叢。培養基常是分化培養基。若芽叢的芽較小?上惹谐裳繀残K,放入MS0培養基中,待到稍大時,再分離開來繼續培養。

增殖使用的培養基對于一種植物來說每次幾乎完全相同,由于培養物在接近最良好的環境條件,營養供應和激素調控下,排除了其它生物的競爭,所以能夠按幾何級數增殖。

在快速繁殖中初代培養只是一個必經的過程,而繼代培養則是經常性不停的進行過程。但在達到相當的數量之后,則應考慮使其中一部分轉入生根階段。從某種意義上講,增殖只是貯備母株,而生根才是增殖材料的分流,生產出成品。

1)繼代培養時材料的玻璃化

實踐表明,當植物材料不斷地進行離體繁殖時,有些培養物的嫩莖、葉片往往會呈半透明狀,呈水跡狀,這種現象通常稱為玻璃化。它的出現會使試管苗生長緩慢、繁殖系數有所下降。玻璃化為試管苗的生理失調癥。

出現玻璃化的嫩莖不宜誘導生根,因此使繁殖系數大為降低。在不同的種類、品種間,試管苗的玻璃化程度也有所差異,當培養基上細胞分裂素水平較高時,容易出現玻璃化現象。在培養基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質,能夠在一定程度上減輕玻璃化的現象發生。

呈現玻璃化的試管苗,其莖、葉表面無蠟質,體內的極性化合物水平較高,細胞持水力差,植株蒸騰作用強,無法進行正常移栽。這種情況主要是由于培養容器中空氣濕度過高,透氣性較差造成的,其具體解決的方法為:

1)增加培養基中的溶質水平,以降低培養基的水勢;

2)減少培養基中含氮化合物的用量;

3)增加光照;

4)增加容器通風,最好進行CO2施肥,這對減輕試管苗玻璃化的現象有明顯的作用;

5)降低培養溫度,進行變溫培養,有助于減輕試管苗玻璃化的現象發生;

6降低培養基中細胞分裂素含量,可以考慮加入適量脫落酸。

 

 

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